Het gilde werd opgericht in 1784 als bijengilde en belangenvereniging voor imkers in de regio. De naam verwijst naar Sint Ambrosius, de patroonheilige van imkers, en herinnert daarmee aan de oorsprong van de vereniging.
In de loop der tijd ontwikkelde het gilde zich tot een schuttersgilde met tradities als koningsschieten en prijsschieten. Door de jaren heen heeft het gilde zich aangepast aan nieuwe tijden, maar tegelijk veel oude gebruiken behouden. Met meer dan 240 jaar geschiedenis is Gilde Sint Ambrosius een van de oudste verenigingen van Loon op Zand en een blijvend onderdeel van de plaatselijke cultuur.